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基因的甲基化程度是影响基因表达量的重要调控因子之一。因应研究及服务一体化, 华联生技以 Illumina Infinium® HumanMethylation450 BeadChip 为服务平台,提供客户甲基化芯片检测服务。

mRNA 的表达检测为例, 先参考基因的 RefSeq ID 进行 SYBR Green 系统的探针设计后, 以 universal reference RNA 为样品测试产物的专一性。 单一波峰表示仅有一个 PCR 产物,如右图所示。 Illumina Infinium® HumanMethylation450 BeadChip 设计450,000+甲基化位点,对RefSeq 数据库基因的覆盖率达到99%,对基因组CpG岛的覆盖率达 96%。并根据研究者需求,加入了以下甲基化位点设计:
  • CpG岛以外的CpG位点
  • 人类干细胞非CpG甲基化位点
  • 正常组织与多种肿瘤组织差异甲基化位点
  • 编码区以外的CpG岛
  • miRNA启动子区域
  • DNase高敏感位点
  • 同时覆盖了90%以上 HumanMethylation27 BeadChip的位点。每张芯片可平行进行12个样本的检测。
  • 甲基化芯片检测流程图
    送样标准
  • 样品类型:细胞、新鲜组织或 DNA 样品。
  • 細胞:106
  • 組織:50mg
  • DNA
  • 质量:基因组 DNA 无明显降解,主带清晰,大于 23Kb,无明显弥散。
    纯度:OD260/280值在1.8-2.0之间;无RNA污染;
    总量:每个样品总量不少于 1μg,浓度 ≥ 50 ng/μl
    溶剂:溶解在H2O或TE(pH 8.0)中

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